HPLC液相色譜儀是在經典色譜法的基礎上，引用了氣相色譜的理論，在技術上，流動相改為高壓輸送；色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經典液相色譜；同時柱后連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進行連續(xù)檢測。
HPLC液相色譜儀的原理說明：
儲液器中的流動相被高壓泵打入檢測系統(tǒng)，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內，由于樣本溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的“吸附-解吸”的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣本濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式輸出檢測結果。
HPLC液相色譜儀一般由溶劑輸送系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)（色譜柱）、檢測系統(tǒng)和數據處理與記錄系統(tǒng)組成，具體包括儲液器、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀或數據工作站等幾部分。其中輸液泵、色譜柱和檢測器是HPLC儀的關鍵部分。
液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。
與試樣預處理技術相配合，HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質上十分相近的物質成為可能，能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離。
HPLC成為解決生化分析問題有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優(yōu)點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領域。液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發(fā)展方向。
液相色譜-質譜聯用技術受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等；液相色譜-紅外光譜聯用也發(fā)展很快，如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類，海水中的不揮發(fā)烴類，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。
